Bêta

Apr 12, 2023

Médecine des communications volume 3, Numéro d'article : 75 (2023) Citer cet article

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Depuis le début de la pandémie de COVID-19, plusieurs variantes préoccupantes (COV) sont apparues pour lesquelles il existe des preuves d'une augmentation de la transmissibilité, d'une maladie plus grave et/ou d'une efficacité vaccinale réduite. Des stratégies vaccinales efficaces contre la COVID-19 sont nécessaires pour obtenir une large immunité protectrice contre les COV actuels et futurs.

Nous avons mené des études d'immunogénicité et de provocation chez des macaques et des hamsters à l'aide d'une formulation de vaccin recombinant bivalent contenant les trimères de Spike stabilisés par préfusion du SRAS-CoV-2 du D614 ancestral et les souches bêta variantes avec l'adjuvant AS03 (CoV2 preS dTM-AS03) dans un primaire cadre de vaccination.

Nous montrons qu'une primo-immunisation avec le CoV2 bivalent preS dTM-AS03 provoque des réponses d'anticorps neutralisants plus larges et durables (1 an) contre les COV, y compris Omicron BA.1 et BA.4/5, et le SARS-CoV-1 par rapport à l'ancêtre Vaccins monovalents variant D614 ou bêta chez des primates non humains naïfs. De plus, la formulation bivalente confère une protection contre la provocation virale avec la souche prototype D614G du SRAS-CoV-2 ainsi que les souches variantes alpha et bêta chez les hamsters.

Nos résultats démontrent le potentiel d'une formulation bivalente CoV2 preS dTM-AS03 contenant du bêta pour fournir une immunogénicité large et durable, ainsi qu'une protection contre les COV dans les populations naïves.

Le SRAS-CoV-2 a changé au fil du temps, entraînant différentes formes du virus appelées variantes. Ces variantes compromettent la protection offerte par les vaccins COVID-19, qui déclenchent une réponse immunitaire contre la protéine virale Spike qui permet au virus de se fixer et d'infecter les cellules humaines, car leurs protéines de pointe sont différentes. Ici, nous avons développé et testé un vaccin contenant deux protéines Spike différentes, l'une de la souche originale de Wuhan et l'autre de la variante Beta. Chez les macaques, le vaccin conduit à la production d'anticorps capables d'empêcher tous les variants testés d'infecter les cellules humaines, dont l'Omicron, avec des niveaux stables sur un an. Chez les hamsters, le vaccin protégeait contre l'infection par le virus ancestral et les variantes Alpha et Beta. Nos résultats ont des implications importantes pour le contrôle des vaccins contre les variantes préoccupantes existantes et futures du SRAS-CoV-2.

Le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2), responsable de la maladie à coronavirus (COVID-19), est apparu fin 2019. Au cours des six premiers mois de la pandémie, un variant avec une seule mutation dans l'antigène Spike (D614G ), a remplacé la souche ancestrale circulante de Wuhan (D614). Cependant, la stabilité génétique relative a pris fin après la première année lorsque des variantes préoccupantes (VOC) présentant de multiples mutations dans l'antigène Spike, ont successivement déplacé la souche précédente, provoquant de multiples vagues d'infections dans le monde. Plusieurs COV ont été identifiés (Alpha, Beta, Gamma, Delta et Omicron BA.1), ainsi que des sous-variantes très diverses d'Omicron, dont certaines ont été classées comme nouveaux COV par le Centre européen de prévention et de contrôle des maladies (BA. 4 et BA.5)1. L'évolution du SRAS-CoV-2 se poursuit à une vitesse plus élevée que prévu et est désormais principalement motivée par l'échappement immunitaire, comme le démontre la forte incidence de la maladie symptomatique d'Omicron chez les personnes vaccinées2. Bien que plusieurs vaccins aient été approuvés pour une utilisation en un temps record, tous les vaccins autorisés ont été initialement conçus pour cibler la souche ancestrale D6143,4.

Il est maintenant bien établi que le SRAS-CoV-2 est endémique, avec une gravité imprévisible5. Ainsi, il existe un besoin urgent non satisfait de vaccins COVID-19 optimisés à l'épreuve des variantes pour fournir une protection large et durable contre les variantes existantes et futures.

En raison du remplacement rapide et continu de BA.1 par d'autres sous-lignées Omicron (BA.2, BA.2.12.1, BA.4, BA.5, BQ.1, BQ.1.1 ...) montrant une évasion immunitaire similaire à plus élevée et des taux de transmission supérieurs à BA.16,7,8,9, les stratégies vaccinales actuelles à la recherche de chaque nouveau variant doivent être réévaluées, tant pour les doses de rappel que pour la primovaccination10,11. En effet, les stratégies vaccinales de nouvelle génération doivent assurer une protection efficace de la population non vaccinée et naïve, comme les jeunes enfants à risque contre les futurs COV en circulation12.

Nous avons récemment montré que les trimères Spike solubles stabilisés par préfusion (CoV2 preS dTM) basés sur la séquence D614 formulés avec l'adjuvant AS03 ont induit un profil de sécurité favorable et une immunogénicité élevée contre la souche ancestrale chez les adultes naïfs13. De plus, nous avons démontré que, chez des macaques sensibilisés, une dose de rappel de CoV2 preS dTM-AS03 (D614 ou Beta) renforçait les anticorps neutralisants (nAbs) contre le virus ancestral et étendait la neutralisation à plusieurs COV (Alpha, Beta, Gamma, Delta , et Omicron) et SARS-CoV-114,15. Les données préliminaires de deux essais cliniques évaluant le CoV2 preS dTM-AS03 comme rappel chez les personnes vaccinées contre la COVID-19 ont confirmé ces résultats et ont en outre suggéré la supériorité des formulations de vaccin monovalent bêta par rapport à l'ARNm monovalent D614 ou aux vaccins sous-unitaires16,17.

Nous rapportons ici l'immunogénicité et la protection d'une formulation de vaccin recombinant bivalent contenant les trimères de Spike stabilisés par préfusion des souches ancestrales D614 et Beta (B.1.351) dans un cadre de vaccination primaire chez les macaques et les hamsters. La séquence Beta Spike a été sélectionnée sur la base de son échappement immunitaire significatif aux prototypes d'anticorps neutralisants induits par le vaccin principalement attribués aux trois mutations RBD (K417N, E484K et Y501N)18,19,20,21. Des macaques cynomolgus et des hamsters naïfs ont été vaccinés avec des candidats vaccins monovalents (D614 ou bêta) ou bivalents (D614 + bêta) CoV2 préS dTM-AS03 pour évaluer les réponses des anticorps neutralisants contre les souches homologues au vaccin, un large panel de COV, y compris les sous-variantes d'Omicron et le SRAS -CoV-1 ainsi que la cellule B mémoire et la durabilité des réponses des anticorps neutralisants. La protection conférée par les formulations vaccinales contenant du bêta a été évaluée chez des hamsters vaccinés après une provocation avec les variantes prototypes D614G, alpha ou bêta.

Nos données montrent que la primo-immunisation avec le candidat vaccin ancestral/bêta bivalent CoV2 preS dTM-AS03 suscite des réponses d'anticorps neutralisants durables jusqu'à 1 an, avec la couverture la plus large contre les COV du SRAS-CoV-2, y compris Omicron BA.1 et BA.4 /5 ainsi que contre le SARS-CoV-1 chez les primates non humains (PNH) naïfs, et confère une protection contre le prototype D614G, Alpha ou Beta variant challenge chez les hamsters.

Les candidats vaccins CoV2 preS dTM D614 ou Beta avec adjuvant AS03 et formulés sous forme de vaccins monovalents ou bivalents ont été décrits précédemment dans les réf. 14,22.

En bref, les candidats vaccins CoV2 preS dTM consistent en une protéine SARS-CoV-2 S recombinée trimérique de préfusion stabilisée. Le CoV2 preS dTM (D614) et Beta ont été conçus sur la base des séquences Wuhan YP_009724390.1 et B.1.351 (GISAID Accession EPI_ISL_1048524), respectivement, avec deux prolines dans le domaine S2, la mutation du site de clivage de la furine et le remplacement de la transmembrane région par le domaine de trimérisation du pli T4. Les CoV2 preS dTM D614 ou Beta ont été produits à l'aide d'une technologie de culture cellulaire propriétaire de Sanofi basée sur le système d'expression cellule d'insecte-baculovirus. Les CoV2 preS dTM D614 ou Beta sont formulés avec l'adjuvant AS03 de GSK.

Les stocks viraux SARS-CoV-2 utilisés pour le challenge ont été préparés chez Bioqual à partir de graines obtenues auprès de Biodefense and Emerging Infections Research Resources Repository (BEI Resources). Le stock SARS-CoV-2 USA/NY-PV08449/2020 (D614G) a été dérivé du stock de semences BEI NR-53515 et a été attribué au lot # 091620-230. Le titre de base est de 9,8 × 104 TCID50/mL (dans VeroE6) et de 5 × 107 TCID50/mL dans Vero TMPRSS2. Le stock de variant alpha du SRAS-CoV-2 (B.1.1.7) a été dérivé du stock de semences BEI NR-54011 et a été attribué au lot # 012921-1230. Le titre de base est de 1,58 × 107TCID50/mL et de 1,38 × 106 PFU/mL dans Vero TMPRSS2. Le stock de variante bêta du SRAS-CoV-2 (B.1.351) a été dérivé du stock de semences BEI NR-54974 et a été attribué au lot n° 030621-750. Le titre de stock a été déterminé dans les cellules VeroE6 et Vero TMPRSS2 via les tests TCID50 et Plaque. Le titre est de 5 × 105 TCID50/mL dans VeroE6 et de 1,99 × 108 TCID50/mL dans Vero TMPRSS2.

Les particules virales rapporteurs (RVP)-GFP utilisées dans le test de neutralisation des pseudovirus à base de lentivirus ont été obtenues auprès d'Integral Molecular (tableau 1).

Les cellules clonales 293T-hsACE2 (Integral Molecular, Cat # C-HA102) utilisées pour le test de neutralisation des pseudovirus à base de lentivirus ont été obtenues auprès d'Integral Molecular et cultivées conformément aux instructions du fabricant.

Des cellules Vero TMPRSS2 (obtenues auprès d'Adrian Creanga, Centre de recherche sur les vaccins-NIAID) ont été cultivées dans du milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) + 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) + gentamicine.

Les expériences sur les animaux ont été menées conformément à toutes les réglementations pertinentes des National Institutes of Health des États-Unis, conformément aux protocoles approuvés pour les animaux par le Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux (IACUC) dans les installations de recherche. L'étude NHP a été réalisée à l'Université de Louisiane au Lafayette New Iberia Research Center et l'étude sur le hamster a été réalisée à Bioqual.

Des macaques cynomolgus, âgés de 2 à 8 ans, ont été randomisés en fonction du sexe, de l'âge et du poids. Les groupes étaient composés de six animaux, dont deux ou trois femelles et quatre ou trois mâles. Des macaques ont été vaccinés à J0 et J21 par voie intramusculaire dans le muscle deltoïde avec différentes formulations vaccinales (avec adjuvant AS03) : monovalent ancestral Spike D614 (5 ou 10 µg), monovalent Beta variant Spike (5 ou 10 µg) ou bivalent D614 + Beta (5 µg + 5 µg) (Fig. 1). Deux autres groupes ont reçu le D614 monovalent (5 µg) à J0 et un vaccin hétérologue à J21 composé soit de Bêta monovalent (5 µg) soit de D614 bivalent + Bêta (5 µg + 5 µg).

Cinq groupes de six macaques cynomolgus ont été immunisés par voie intramusculaire avec des candidats vaccins CoV2 preS dTM-AS03 au jour 0 (J0) et au jour 21 (J21). Les candidats vaccins monovalents ancestraux D614 et Beta (B.1.351) ont été utilisés à deux doses d'antigène différentes : 5 et 10 µg. Le candidat bivalent D614 + Beta a été utilisé à 5 µg + 5 µg.

Des échantillons de sang ont été prélevés avant immunisation à J0 et J21, ainsi qu'à J34, J70, J114, J206 et J365.

Des hamsters syriens dorés femelles âgés de 6 à 8 semaines ont été randomisés en fonction du poids. Les candidats vaccins ont été administrés à J0 et J21 par voie intramusculaire dans le quadriceps de la patte arrière. Vingt-quatre hamsters par groupe ont été vaccinés soit avec du monovalent D614 à 1 µg ou Beta à 1 µg soit avec du bivalent D614 + Beta à 1 µg + 1 µg. Des échantillons de sang ont été prélevés avant la vaccination (J0 et J21) et à J35. Vingt-huit jours après la deuxième dose, 8 hamsters par groupe ont été provoqués par voie intranasale avec la souche NY (D614G) à 9,8 × 103 TCID50 (VeroE6) ou Beta à 5 × 102 TCID50 (VeroE6) ou Alpha à 1,6 × 106 TCID50 , (Vero TMPRSS2) doses infectieuses précédemment déterminées comme entraînant une perte de poids corporel de 10 à 20 % 7 jours après la provocation. Le poids corporel a été surveillé quotidiennement jusqu'à la fin de l'étude, c'est-à-dire 4 ou 7 jours après l'épreuve pour la moitié du nombre d'animaux par groupe par point de temps. Les poumons ont été prélevés 4 ou 7 jours après la provocation pour l'évaluation de la charge virale et de la pathologie.

Un panel de sérum humain convalescent (N = 93) a été obtenu auprès de fournisseurs commerciaux (Sanguine Biobank, iSpecimen et PPD). Les échantillons de sérum ont été prélevés dans les 3 mois suivant le diagnostic PCR-positif de COVID-19 en 2020.

La norme internationale de l'OMS pour l'immunoglobuline anti-SARS-CoV-2 (humaine) (code NIBSC : 20/136) a également été utilisée pour permettre l'étalonnage précis des tests à une unité arbitraire, réduisant ainsi la variation inter-laboratoires et créant un langage commun pour rapporter les données.

Le test a été décrit précédemment dans la réf. 14. Les variants Mu (B.1.621) et Omicron BA.4/5 ont été ajoutés au panel de pseudovirus (Tableau 1).

Les échantillons de sérum ont été dilués à 1:4 ou 1:20 dans un milieu (DMEM sans rouge de phénol FluoroBrite + 10% FBS + 10 mM HEPES + 1% PS + 1% Glutamax) et inactivés par la chaleur à 56 ° C pendant 30 min. En outre, une série de dilutions en deux fois, 11 points, du sérum inactivé par la chaleur a été réalisée dans le milieu. Des échantillons de sérum dilués ont été mélangés avec des particules virales rapporteurs (RVP)-GFP (moléculaire intégrale) répertoriées dans le tableau ci-dessous (tableau 1) diluées pour contenir environ 300 particules infectieuses par puits et incubées pendant 1 h à 37 ° C. Des plaques à 96 puits d'environ 50 % de cellules clonales 293T-hsACE2 confluentes (Integral Molecular, Cat# C-HA102) dans un volume de 75 µL ont été inoculées avec 50 µL des mélanges sérum + virus et incubées à 37 °C pendant 72 h. À la fin de l'incubation de 72 h, les plaques ont été numérisées sur un imageur à haute teneur et les cellules individuelles exprimant la GFP ont été comptées. Le titre d'anticorps neutralisant a été rapporté comme l'inverse de la dilution qui a réduit le nombre de plaques virales dans le test de 50 %.

Le dosage qualifié du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV) et du pseudovirus D614 ancestral (Nexelis, Laval, Canada) a été effectué comme décrit précédemment. En bref, des particules virales pseudotypées ont été produites à partir d'un squelette modifié du virus de la stomatite vésiculeuse (VSVΔG) portant le pic SARS-CoV-2 (Wuhan) et exprimant le rapporteur luciférase pour la détection. Une dilution en série double de sérums inactivés par la chaleur a été mélangée avec 75 000 à 300 000 unités de luminescence relative (RLU) et incubée à 37 ° C, 5 % de CO2 pendant 60 min. Le mélange a ensuite été transféré dans des plaques à 96 puits préalablement ensemencées pendant une nuit avec des cellules VeroE6 et incubées à 37 ° C, 5 % de CO2 pendant 20 h. Après l'ajout du substrat de luciférase, les plaques ont été lues pour la luminescence sur un Spectramax 340PC Versamax). L'intensité de luminescence quantifiée en RLU, est inversement proportionnelle aux anticorps neutralisants présents dans le sérum. Les titres d'anticorps neutralisants ont été calculés comme l'inverse de la dilution du sérum entraînant une réduction de 50 % de la RLU mesurée en l'absence de sérum.

Les IgG spécifiques de S ont été dosées par ELISA indirect. Les plaques de micropuits Nunc ont été recouvertes de protéine Spike SARS-CoV S-GCN4 (GeneArt, exprimée dans la lignée cellulaire Expi 293) à 0,5 µg/mL dans du PBS à 4 °C pendant la nuit. Les plaques ont été lavées trois fois avec du PBS-Tween 0, 1% avant de les bloquer avec 1% de BSA dans du PBS-Tween 0, 1% pendant 1 h. Les échantillons inactivés par la chaleur ont été étalés à une dilution initiale de 1:450 suivie de dilutions en série de trois à sept points dans un tampon de blocage. Les plaques ont été lavées trois fois après une incubation de 1 h à température ambiante avant d'ajouter un anticorps secondaire. Les plaques ont été incubées à température ambiante pendant 1 h et lavées trois fois. Les plaques ont été développées à l'aide de la solution de substrat Pierce 1-Step Ultra TMB-ELISA pendant 6 min et arrêtées par la solution TMB STOP. Les plaques ont été lues à 450 nm dans un lecteur de plaques SpectraMax® et les données analysées à l'aide du logiciel Softmax® Pro 6.5.1 GxP et du logiciel propriétaire Sanofi Universal Exporter 2.1. Les titres d'anticorps ont été rapportés comme la dilution la plus élevée qui est égale au seuil de 0,2-OD.

Les cellules B mémoire ont été analysées à l'aide du kit ELISpot Human IgG Single-color B cell (CTL, CAT # NC1911372). Les PBMC cryoconservés ont été rapidement décongelés dans un bain-marie à 37 ° C. Un mélange de sérum de veau fœtal (FCS)/DNAse I (200 unités/mL) a été ajouté lentement aux PBMC, avant d'être transféré dans un milieu de culture cellulaire complet (CM) (RPMI-1640 avec 10 % de FCS et un cocktail d'antibiotiques). Après centrifugation et remise en suspension dans 6 mL de CM, les PBMC ont été transférés dans des plaques à six puits et incubés à 37 °C avec 5 % de CO2 pendant 1 h. Ensuite, du B-Poly-STM a été ajouté à une dilution de 1:1000 pour la stimulation cellulaire, pendant 4 jours à 37°C avec 5% de CO2.

Les PBMC préstimulés ont été récoltés et centrifugés à 433 × g pendant 5 min à température ambiante (RT). Après lavage, les PBMC ont été comptés à l'aide du compteur de cellules Guava® easyCyte et les cellules ont été ajustées à la concentration souhaitée avec CM.

Quatre-vingt-seize plaques-puits avec membrane PVDF ont été perméabilisées avec 15 μL d'éthanol à 70% pendant 1 min maximum, puis lavées trois fois avec une solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS) 1X avant d'être recouvertes de 80 μL d'anticorps de capture d'Ig humaine (Ab) dilué au 1:50 ou avec la protéine SARS-CoV2 S-GCN4, souche Wuhan (GeneArt, exprimée dans la lignée cellulaire Expi 293) ou souche BA.5 (Sino Biologicals, exprimée dans les cellules HEK293) à 4 µg/mL ou avec PBS. Les plaques ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C puis lavées trois fois avec du PBS stérile et avec du CM pendant 1 h à TA. Le CM a ensuite été retiré et des PBMC ont été ajoutés à 3 × 105 cellules / puits dans la protéine S-GCN4 (souche Wuhan ou BA.5) et les puits recouverts de PBS, et à 5 × 103 cellules dans les puits recouverts d'Ab de capture d'Ig, moins de 100 μL/puits. Chaque condition a été testée en double et les plaques ont été incubées pendant 18 h à 37 °C avec 5 % de CO2.

Pour révéler les cellules sécrétant des anticorps, les plaques ont d'abord été lavées deux fois avec du PBS, puis deux fois avec du Tween PBS à 0, 05%, puis une solution de détection d'IgG anti-humaine a été ajoutée sous 80 µL. Après 2 h d'incubation à température ambiante, les plaques ont été lavées trois fois avec du Tween PBS à 0,05 % et une solution tertiaire a été ajoutée sous 80 µL. Les plaques ont été incubées pendant 1 h à température ambiante, puis lavées deux fois avec du Tween PBS à 0,05 % et deux fois avec de l'eau distillée. Une solution de révélateur bleu a été ajoutée sous 80 µL et incubée à température ambiante pendant 15 à 20 min. La réaction a été arrêtée en rinçant la membrane de la plaque avec de l'eau et en décantant trois fois. Les plaques ont été séchées à l'air, puis scannées et lues à l'aide de l'analyseur Cytation 7. Le nombre de taches avec le PBS uniquement (arrière-plan) a été soustrait du nombre de taches d'IgG spécifiques au S ou totales. Les résultats sont exprimés en cellules B mémoire sécrétant des IgG spécifiques de S/million de PBMC et en % de cellules B mémoire sécrétant des IgG spécifiques de S parmi toutes les cellules B mémoire sécrétant des IgG circulantes.

Les cellules THP-1 (ATCC) ont été maintenues dans du RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (FBS), 5 % de pénicilline/streptomycine (Corning, 50 µg/mL), 5 % de l-glutamine (Corning , 4 mM), tampon HEPES 5 % (pH 7,2) (Corning, 50 mM) et 0,5 % 2-mercaptoéthanol (Gibco, 275 µM) à 37 °C, 5 % CO2. L'ADCP a été réalisée comme décrit précédemment dans la réf. 23. En bref, D614 Spike, Beta Spike ou Omicron Spike (Sino Biological) ont été biotinylés et couplés à des NeutrAvidin FluoSpheres jaune-vert (Invitrogen). Des complexes immuns ont été formés en mélangeant des billes couplées à l'antigène avec du sérum dilué au 1:100 dans du PBS. Les complexes immuns ont été incubés pendant 2 h à 37 ° C et lavés dans du PBS. Des cellules THP-1 ont été ajoutées à des complexes immuns à une concentration de 1,25 × 105 cellules/mL et incubées pendant une nuit à 37 °C, 5 % de CO2. La capacité des anticorps à entraîner l'absorption des billes par les cellules THP-1 a été évaluée par cytométrie en flux à l'aide d'un cytomètre BD LSR II. Les PhagoScores ont été calculés comme suit : (% billes + cellules × GeoMean des cellules)/10000. Les échantillons ont été analysés en double et les données représentent la moyenne des doubles.

L'ADNP a été réalisée comme décrit précédemment dans la réf. 24. Le sang total périphérique a été prélevé par l'Institut Ragon sur des volontaires sains. Les volontaires ont fourni un consentement signé, avaient plus de 18 ans et ont été anonymisés. L'étude a été approuvée par le comité d'examen institutionnel du MGH. Les globules rouges ont été lysés par lyse au chlorure d'ammonium potassium (ACK). Les globules blancs ont été lavés avec du PBS et maintenus dans un milieu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) (Sigma-Aldrich), 5 % de pénicilline/streptomycine (Corning, 50 µg/mL), 5 % de l-glutamine (Corning, 4 mM), 5 % de tampon HEPES pH 7,2 (Corning, 50 mM) et 37 °C, 5 % de CO2 pendant la durée de l'essai. Les FluoSpheres NeutrAvidin jaune-vert ont été couplées à l'antigène comme décrit pour l'ADCP. Des complexes immuns ont été formés en mélangeant du sérum dilué à 1:50 dans du PBS avec des billes couplées et en incubant pendant 2 h à 37 ° C. Les complexes immuns ont été lavés et des globules blancs ont été ajoutés à une concentration de 2,5 × 105 cellules/mL. Les cellules ont été incubées avec des complexes immuns pendant 1 h à 37 °C. PacBlue anti-CD66b (BioLegend, clone : UCH71) a été utilisé pour colorer les neutrophiles. La phagocytose a été mesurée par cytométrie en flux à l'aide d'un iQue (Intellicyt). La phagocytose par les neutrophiles (CD66b+) a été calculée comme décrit pour l'ADCP. L'expérience a été réalisée avec deux donneurs et la valeur rapportée est la moyenne des deux donneurs.

L'ADCD a été réalisée comme décrit précédemment dans la réf. 25. Les FluoSpheres NeutrAvidin rouges ont été couplées à l'antigène comme décrit pour l'ADCP. Des complexes immuns ont été formés en mélangeant du sérum dilué au 1/10 dans du PBS avec des billes couplées et en incubant pendant 2 h à 37 °C. Les complexes immuns ont été lavés et du complément de cobaye lyophilisé (Cedarlane) dilué dans un tampon de gélatine véronal avec du calcium et du magnésium (Sigma-Aldrich) a été ajouté aux complexes immuns et incubé pendant 20 min à 37 ° C. Le dépôt de C3 a été mesuré par C3 FITC anti-cobaye (MpBio). La fluorescence a été acquise à l'aide d'un cytomètre BD LSR II. Le dépôt de C3 est rapporté comme l'intensité de fluorescence médiane du FITC. L'expérience a été réalisée en double, et la valeur rapportée est la moyenne des deux répétitions.

L'ADNKA a été réalisée comme décrit précédemment dans la réf. 26. Les plaques ELISA ont été recouvertes de 2 µg/mL d'antigène et incubées pendant 2 h à 37 °C. Les plaques ont été lavées avec du PBS et bloquées pendant une nuit avec de l'albumine de sérum bovin (BSA) à 5 % à 4 °C. Des buffy coats ont été prélevés par le Massachusetts General Hospital auprès de donneurs sains âgés de plus de 18 ans et ayant fourni un consentement signé. Les échantillons ont été anonymisés avant utilisation. Les cellules NK ont été isolées des couches leucocytaires à l'aide de RosetteSep (STEMCELL Technologies), puis séparées à l'aide d'un gradient de ficoll. Les cellules NK ont été laissées au repos pendant une nuit à 37 °C, 5 % de CO2 dans du milieu R10 (RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) (Sigma-Aldrich), 5 % de pénicilline/streptomycine (Corning, 50 µg/mL), 5 % de l-glutamine (Corning, 4 mM), 5 % de tampon HEPES (pH 7,2) (Corning, 50 mM)) additionné de 2 ng/mL d'IL-15. Le jour suivant, les plaques ont été lavées et des échantillons dilués à 1:25 dans du PBS ont été ajoutés aux plaques. Les plaques ont été incubées pendant 2 h à 37 °C, lavées et des cellules NK ont été ajoutées à une concentration de 2,5 × 05 cellules/mL dans du milieu R10 additionné d'anti-CD107a–phycoérythrine (PE)–Cy5 (BD Biosciences, lot # 0149826 , dilution 1:1000), brefeldine A (10 µg/ml) (Sigma-Aldrich) et GolgiStop (BD Biosciences). Les plaques ont été incubées pendant 5h à 37°C. Après l'incubation, les cellules ont été colorées pour les marqueurs de surface avec anti-CD3 Pacific Blue (BD Biosciences, clone G10F5), anti-CD16 allophycocyanine (APC)-Cy5 (BD Biosciences, clone 3G8) et anti-CD56 PE-Cy7 (BD Biosciences, clone B159) pendant 15 min à température ambiante. Les cellules ont été fixées avec PermA (Life Technologies) et perméabilisées avec PermB (Life Technologies) et colorées avec anti-MIP-1β PE (BD Biosciences) et anti-IFN gamma FITC pendant 15 min à température ambiante. La fluorescence a été analysée par cytométrie en flux à l'aide d'un BD LSR II. Les cellules NK ont été contrôlées en tant que CD56 + CD16 + CD3- et l'activité a été déterminée en pourcentage de cellules NK positives pour CD107a, MIP-1b ou IFNg. Le test a été réalisé avec deux donneurs et les données rapportées représentent la moyenne des deux donneurs.

Titre d'isotype d'anticorps spécifique à l'antigène et récepteur Fc (FcR) - la liaison a été déterminée par un test multiplex Luminex, comme décrit précédemment dans la réf. 27. Des microsphères mégaplex carboxylées (Luminex) ont été liées de manière covalente à des antigènes à l'aide de liaisons NHS-ester par l'ajout de Sulfo-NHS et d'EDC (Thermo Fisher). Des complexes immuns ont été formés en ajoutant un sérum dilué à des microsphères couplées à l'antigène, et les plaques ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C, sous agitation à 700 tr/min. Le jour suivant, les plaques ont été lavées avec 0,1 % de BSA et 0,02 % de Tween-20. Pour la détection du titre d'isotype d'anticorps, des anticorps de détection anti-humains de souris couplés à la PE (Southern Biotech) ont été ajoutés aux plaques. Pour la détection de la liaison au FcR, les FcR humains marqués par Avi (Duke Human Vaccine Institute) ont été biotinylés à l'aide d'un kit BirA500 (Avidity) selon les instructions du fabricant et marqués avec de la streptavidine-PE. Le FcR marqué PE a été ajouté au complexe immun. La fluorescence a été acquise à l'aide d'un iQue (Intellicyt) et les données représentent l'intensité de fluorescence médiane (MFI). Le test Luminex a été exécuté en double, et les données rapportées représentent la moyenne des doubles. Chaque test Luminex a été réalisé avec des dilutions multiples pour le même antigène. Des données représentatives ont été présentées.

Le test TCID50 a été réalisé par l'ajout de dilutions graduées au 10ème d'échantillons à des monocouches TMPRSS2. Plus précisément, des cellules Vero TMPRSS2 (obtenues auprès d'Adrian Creanga, Vaccine Research Center-NIAID) ont été étalées à 25 000 cellules/puits dans DMEM + 10 % FBS + Gentamicine et les cultures ont été incubées à 37 °C, 5 % CO2. Le milieu a été aspiré et remplacé par 180 μL de DMEM + 2% FBS + gentamicine. Vingt (20) μL de l'échantillon ont été ajoutés à la rangée supérieure en quatre exemplaires et mélangés à l'aide d'un pipeteur P200 cinq fois. À l'aide de la pipette, 20 μL ont été transférés dans la rangée suivante et répétés sur la plaque (colonnes A à H), représentant des dilutions au 1/10. Les pointes ont été disposées pour chaque rangée et répétées jusqu'à la dernière rangée. Des puits de contrôle positifs (stock de virus de titre infectieux connu dans le test) et négatifs (milieu uniquement) ont été inclus dans chaque configuration de test. Les plaques ont été incubées à 37°C, 5% CO2 pendant 4 jours. Les monocouches cellulaires ont été inspectées visuellement pour l'effet cytopathique (CPE). La valeur TCID50 a été calculée à l'aide de la formule de Read-Muench. Pour les échantillons qui avaient moins de 3 puits positifs à l'ECP, la TCID50 n'a pas pu être calculée à l'aide de la formule de Reed-Muench, et ces échantillons ont reçu un titre inférieur à la limite de détection (c. TCID50/gramme et challenge Beta 1.550 TCID50/gramme). Pour des performances de test optimales, la valeur TCID50 du contrôle positif doit être testée dans le double de la valeur attendue.

Des échantillons entiers de poumon de hamster gauche ont été prélevés dans du formol tamponné neutre (NBF) à 10 %, traités en routine et inclus en paraffine. Les blocs de paraffine ont été sectionnés à environ 5 microns et colorés à l'aide d'hématoxyline et d'éosine (H&E). Un pathologiste vétérinaire certifié par le conseil a évalué à l'aveugle les lames H&E à la fois qualitativement et semi-quantitativement pour la pathologie pulmonaire. Des scores semi-quantitatifs ont été établis en fonction du pourcentage de poumons touchés. Les poumons qui correspondaient à un tissu normal recevaient un score de 0. Si moins de 25 % de la section révélait une histopathologie, un score de 1 était attribué. Un score de 2 a été attribué aux coupes pulmonaires dans lesquelles l'histopathologie était présente dans plus de 25 % mais moins de 50 % du poumon. Si plus de 50 % du parenchyme pulmonaire était atteint, un score de 3 était attribué. L'expression de la protéine de nucléocapside a été évaluée par immunohistochimie basée sur le chromogène DAB avec un anticorps polyclonal de lapin anti-SARS-CoV-2 nucléocapside (GTX135357, GeneTex, Inc, USA) dans la plateforme d'immunocoloration automatisée Leica BondRX (Leica, USA) comme décrit précédemment28. La zone immuno-positive de la nucléocapside a été mesurée dans des coupes pulmonaires à l'aide d'un algorithme de pourcentage de surface du logiciel d'analyse d'images HALO (Indica Labs, États-Unis).

La puissance de l'étude a été estimée sur la base du titre de neutralisation des pseudovirus, en considérant que la différence pertinente minimale correspondait au triple (0,5 log), avec un écart type de 0,3 log (c'est-à-dire observé dans les études précédentes). Dans un tel contexte, une taille d'échantillon de 6 PSN par groupe a été jugée acceptable pour montrer une différence entre les 11 groupes avec une puissance supérieure à 75 %.

Au moment de l'assignation, les caractéristiques initiales (sexe, âge et poids) ont été équilibrées pour avoir des groupes comparables. Les titres ELISA et les titres neutralisants ont été transformés en log10 avant l'analyse statistique.

Tous les tests statistiques étaient bilatéraux, le niveau nominal de signification statistique a été fixé à α = 0,05 pour les estimations de la taille de l'effet, α = 0,01 pour les tests de normalité et α = 0,10 pour les termes d'interaction. Les analyses ont été réalisées sur SEG SAS v9.4®.

Pour toutes les lectures des études PSN et les titres ELISA de l'étude hamster, des analyses ont été réalisées à l'aide de modèles mixtes avec le produit, le temps et leur interaction comme facteurs fixes, un temps considéré comme répété, et des cohortes ajoutées comme effet aléatoire pour le hamster. étude. Pour les titres neutralisants de l'étude sur le hamster ainsi que les réponses des cellules B mémoire sécrétant des IgG spécifiques à Omicron BA.5 Spike de l'étude NHP, comme seules des données ponctuelles étaient disponibles, une ANOVA à une voie utilisant un modèle mixte avec un produit comme un facteur fixe et des cohortes comme effet aléatoire ont été réalisées. La normalité du résidu du modèle a été vérifiée à l'aide d'un diagramme de probabilité normale, et les résultats ont été considérés comme acceptables.

Une corrélation de Spearman entre les titres de PsV et la perte de poids a été réalisée.

Pour l'analyse univariée de la sérologie du système, les statistiques ont été calculées à l'aide de GraphPad Prism version 8.0. La signification a été déterminée par un test de Kruskal-Wallis. Les cartes thermiques et les tracés polaires ont été créés en Python (version 3.9.1). Les tracés polaires montrent le rang centile médian pour chaque entité. Les cartes thermiques montrent les données notées z.

De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé des rapports de recherche sur la nature lié à cet article.

Nous avons d'abord vérifié l'interférence immunitaire potentielle entre les deux valences dans la formulation bivalente par rapport aux formulations monovalentes D614 ou Beta. Des macaques cynomolgus naïfs ont été immunisés à J0 et J21 avec la formulation du vaccin bivalent CoV2 preS dTM-AS03 (D614 + Beta) à la dose de 5 µg + 5 µg, ou des vaccins monovalents CoV2 preS dTM-AS03 (D614 ou Beta) à 5 µg et 10 doses µg (Fig. 1).

Les réponses d'anticorps neutralisants contre la souche ancestrale Wuhan D614 et le Beta VOC ont été analysées deux semaines après la dose 2 à l'aide de tests de pseudovirus à base de lentivirus (lentivirus-PsV). Le candidat vaccin bivalent a suscité des titres de nAb élevés et constants contre le SARS-CoV-2 D614 ancestral, avec des titres moyens de 3,0 log10 ± 0,4 log10 écart type (SD) (Fig. 1a supplémentaire), non significativement différents de ceux induits par le monovalent D614 à 5 µg (titres moyens de 3,1 log10) et 10 µg (titres moyens de 3,4 log10), mais significativement plus élevés que ceux induits par le vaccin bêta monovalent à 10 µg (titres moyens de 2,3 log10, P = 0,0017, multiplication moyenne de 4,9 ). L'absence d'interférences immunitaires négatives dans la formulation bivalente a été confirmée à l'aide d'un test qualifié D614 du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV)-pseudovirus (Fig. 1b supplémentaire).

Comme prévu, le vaccin bivalent a également provoqué des titres de nAb élevés et constants contre le pseudovirus bêta chez tous les macaques, avec une moyenne de 3,0 log10 ± 0,3 log10 SD, équivalents à ceux induits par le vaccin bêta monovalent à 5 µg et 10 µg (Fig. 1c) et significativement supérieures à celles induites par le D614 monovalent à 10 µg (multiplication moyenne par sept, P < 0,001).

Dans l'ensemble, le CoV2 preS dTM-AS03 bivalent a induit des titres de nAb robustes et équilibrés contre la souche ancestrale D614 et la variante bêta, sans interférences immunitaires détectables.

Nous avons ensuite évalué l'étendue de la neutralisation conférée par le vaccin bivalent contre d'autres COV, D614G, Alpha et Delta (contenant tous la position E484 d'origine), Gamma et Mu (contenant la mutation E484K présente dans Beta) et l'Omicron BA plus éloigné. 1 (contenant la mutation E484A parmi 15 mutations du RBD) et SARS-CoV-1. Le vaccin bivalent a été comparé aux formulations de vaccin monovalent au même moment (c'est-à-dire 2 semaines après la deuxième dose) (Fig. 2a).

Des groupes de six macaques naïfs ont été immunisés deux fois à 3 semaines d'intervalle avec le vaccin bivalent (5 µg + 5 µg), monovalent D614 ou monovalent Beta (10 µg). Les titres d'anticorps neutralisants ont été mesurés 2 semaines après la deuxième dose. a Titres d'anticorps neutralisants de pseudovirus à base de lentivirus contre le D614 ancestral et le prototype D614G, les variantes préoccupantes (Alpha, Beta, Gamma, Delta, Mu et Omicron BA.1) et le SRAS-CoV-1 2 semaines après la dose 2 Les données individuelles des macaques ont été présentées. b Un panel de sérums humains convalescents (N = 93) a été dosé contre le pseudovirus ancestral D614 et est tracé comme comparateur. La ligne pointillée représente le code NIBSC de la norme internationale de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) pour l'immunoglobuline anti-SARS-CoV2 (humaine) : 20/136. Les lignes pointillées horizontales indiquent les limites de quantification du dosage. Les barres représentent les moyennes et les intervalles de confiance à 95 %.

Le vaccin bivalent a provoqué des titres de nAb élevés et homogènes contre tous les COV, à l'exception d'Omicron BA.1, avec des titres moyens allant de 2,8 log10 contre Delta à 3,5 log10 contre Gamma. Comparé au vaccin monovalent D614 (10 µg), le vaccin bivalent a induit des titres de nAb équivalents contre D614, D614G, Alpha et Delta (titres moyens de 3 à 3,5 log10), mais des titres de nAb plus élevés contre Beta, Gamma et Mu ( titres moyens de 2,2 à 2,4 log10, P < 0,001, multiplication moyenne de 6,1 à 12,2). À l'inverse, par rapport au bêta monovalent, le vaccin bivalent a induit des titres de nAb plus élevés contre D614, D614G, Alpha et Delta (titres moyens de 2,1 à 2,5 log10, multiplication moyenne de 3,3 à 5,8, P < 0,05) mais des titres de nAb équivalents contre Beta, Gamma et Mu (titres moyens de 2,9 à 3,3 log10).

Pour Omicron BA.1 et SARS-CoV-1, le vaccin bivalent a induit des titres détectables chez tous les animaux, avec des titres moyens d'environ 2,0 log10, alors que les réponses nAb étaient plus variables dans les groupes de vaccin monovalent.

Les résultats indiquent que le candidat-vaccin bivalent ancestral/bêta suscite des réponses nAb robustes et équilibrées contre les virus contenant E484 d'origine (D614, D614G, Alpha et Delta), les virus contenant E484K (bêta, gamma et mu) et les virus inférieurs mais des réponses attrapées cohérentes contre le lointain Omicron BA.1 (E484A) et le SARS-CoV-1.

À titre de comparaison, le vaccin bivalent a suscité des titres moyens de nAb D614 supérieurs à ceux mesurés dans la norme internationale de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) pour l'immunoglobuline anti-SARS-CoV-2 (code NIBSC : 20/136 ; 2,8 log10 dans notre test lentivirus-pseudovirus ) et supérieures à celles mesurées dans un panel de 93 sérums humains convalescents (prélevés dans les 3 mois après un test PCR positif ; 2,0 log10 ; Fig. 2b). L'étalon international pour les immunoglobulines anti-SARS-CoV-2, adopté par le comité d'experts de l'OMS sur la normalisation biologique le 10 décembre 2020 permet la comparaison des titres par rapport au D614 généré dans différents tests de neutralisation, il a été attribué une puissance de 1000 UI/ mL29.

Pour évaluer le bénéfice de l'immunisation primaire/rappel hétérologue sur la neutralisation croisée, deux schémas d'immunisation alternatifs ont été testés, où une première dose avec le monovalent D614 (5 µg) (J0) a été suivie d'une seconde dose (J21) avec soit le vaccin monovalent Vaccins bêta (5 µg) ou bivalents (5 µg + 5 µg) (Fig. 2a supplémentaire).

Par rapport au schéma posologique à 2 doses du vaccin monovalent D614, la deuxième injection de bêta monovalent a pu étendre l'étendue de la réponse neutralisante au bêta et aux autres COV, tandis que la deuxième injection avec le bivalent n'a pas amélioré l'étendue. Cependant, l'amorçage/rappel hétérologue avec la bêta monovalente pour la deuxième injection a induit une variabilité plus élevée et des titres légèrement inférieurs au schéma posologique à 2 doses du vaccin bivalent (non significatif pour les titres nAb moyens D614, D614G, Alpha et Delta, 3- et 4.1- fois inférieur pour Beta, P = 0,0165 et Gamma, P = 0,0052 titres moyens de nAb, respectivement) (Fig. 2b supplémentaire).

Pour faire face au déclin potentiel des anticorps neutralisants, nous avons mesuré les titres de nAb contre le prototype D614G, Beta et Omicron BA.1 dans le sang des animaux vaccinés jusqu'à 1 an après la vaccination (D365) avec les formulations de vaccins bivalents et monovalents à 10 µg dose totale d'antigène (Fig. 3).

Les titres d'anticorps neutralisant le pseudovirus contre a le prototype D614G SARS-CoV-2, b la variante Beta et c la variante Omicron (BA.1) ont été évalués à différents moments après l'immunisation de macaques cynomolgus avec le monovalent D614 (10 µg), monovalent Bêta (10 µg) ou bivalent D614 + Bêta (5 µg + 5 µg). Les données individuelles des macaques sont présentées (N = 6/groupe). Les lignes de connexion indiquent les réponses moyennes et la ligne pointillée horizontale est la limite de quantification du dosage.

Pour chaque formulation de vaccin, les titres de nAb contre le prototype D614G et le variant bêta ont culminé à J34, diminué jusqu'à J70 ou J114, puis sont restés stables jusqu'à 1 an (J365). A 1 an, les titres moyens de nAb contre le prototype D614G et le variant Beta étaient respectivement de 2,7 et 2,5 log10 pour le vaccin bivalent, 2,8 et 1,8 log10 pour le monovalent D614 et 2,4 et 2,6 log10 pour le monovalent Beta (Fig. 3a, b).

Les titres neutralisants contre Omicron BA.1 ont été évalués à J0, J34, J206 et J365 et contre BA.4/5 à 1 an. Tous les animaux avaient des titres BA.1 PsV nAb détectables jusqu'à un an, sauf dans le groupe du vaccin monovalent D614 (Fig. 3c). Les titres moyens de nAb contre Omicron BA.1 (Fig. 3c) et BA.4/5 (Fig. 4) à 1 an étaient respectivement de 2,2 et 2,0 log10 pour le bivalent, 1,7 et 1,7 log10 pour le monovalent D614 et 2,1 et 1,7 log10 pour le bêta monovalent.

Les titres d'anticorps neutralisant le pseudovirus contre Omicron BA.4/5 dans des sérums de macaques individuels sont indiqués (N = 6/groupe ; un échantillon manquait dans le groupe vaccin monovalent bêta). Diamants bleus : formulation bivalente D614 + Beta ; carrés noirs : formulation D614 ; points violets : formulation bêta. Les barres indiquent les réponses moyennes et les lignes pointillées horizontales correspondent à l'inverse de la plus faible dilution du dosage.

Les titres moyens Alpha et Gamma des nAb à 3 mois (J114) étaient respectivement de 2,6 et 2,6 log10 pour les groupes vaccin bivalent, 2,7 et 2,1 log10 pour le monovalent D614, 2,3 et 2,8 log10 pour le monovalent Beta (Fig. 3a supplémentaire, b). Les titres moyens de nAb de la variante Delta à 7 mois (D206) étaient de 2,1 log10 (bivalent), 2,2 log10 (monovalent D614) et 1,8 log10 (bêta monovalent) (Fig. 3c supplémentaire).

Fait intéressant, la décroissance est apparue moins prononcée pour les réponses de neutralisation croisée que pour les réponses de neutralisation homologues au vaccin. Il convient de noter que les réponses de neutralisation croisée avaient tendance à culminer à des titres inférieurs à ceux des réponses de neutralisation homologues au vaccin (Fig. 3 et Fig. 3 supplémentaire). Ainsi, la différence entre les titres neutralisants homologues et hétérologues était moindre à 1 an après l'immunisation qu'à 2 semaines après la deuxième dose. Cela est particulièrement vrai pour Omicron BA.1 pour lequel aucune baisse significative des titres de nAb n'a été observée avec les trois formulations de vaccin entre J34 et 1 an.

La modélisation de la décroissance de l'Ab sur la base des données expérimentales a indiqué qu'après la décroissance initiale, les titres du prototype D614G nAb ont atteint un plateau dans le groupe bivalent à J98 à 2,6 log10 et sont restés stables jusqu'à 1 an (J365). Pour le groupe monovalent D614 10 µg, un plateau a été atteint à J89, avec un titre moyen estimé à 2,8 log10. Dans le groupe monovalent Beta 10 µg, le plateau a été atteint à J34 à 2,3 log10, indiquant l'absence de décroissance des nAb D614G sur un an dans ce groupe.

Les titres de bêta nAb ont atteint un plateau pour tous les groupes, estimés à 2,4 log10 à J111, 1,8 log10 à J113, 2,5 log10 à J114 pour le bivalent, le monovalent D614 et le bêta monovalent, respectivement.

En ce qui concerne les titres Omicron BA.1 nAb, aucun modèle mathématique n'a été réalisé en raison des quelques moments (J34, 206 et 365) évalués après la vaccination, néanmoins, aucun effet de temps statistiquement significatif n'a été observé de J34 à 1 an (J365), ce qui signifie les titres neutralisants sont stables sur 1 an.

À 1 an, des réponses ancestrales des cellules B mémoire sécrétant des IgG D614 et Omicron BA.5 Spike spécifiques ont été détectées pour tous les animaux à des niveaux similaires dans les trois groupes de vaccins, c'est-à-dire D614 bivalent, monovalent et bêta monovalent (Fig. 5). Une fois ajustées aux cellules B mémoire IgG totales, les réponses étaient très homogènes au sein des groupes. Les médianes des lymphocytes B mémoires ancestraux D614 S spécifiques/total sécrétant des IgG étaient de 0,46, 0,19 et 0,39 % pour les groupes de vaccins bivalent, monovalent D614 et monovalent bêta, respectivement. Des cellules B à mémoire de pointe D614 ancestrales significativement plus élevées ont été détectées dans les groupes bêta bivalents et monovalents par rapport à la formulation D614 monovalente. Les médianes des cellules B mémoire sécrétant des IgG spécifiques/totales d'Omicron BA.5 S étaient de 0,21, 0,19 et 0,29 % pour les groupes de vaccin bivalent, monovalent D614 et bêta monovalent, respectivement, sans différences significatives entre les groupes.

Réponses des lymphocytes B mémoires sécrétant des IgG spécifiques à la pointe à 1 an induites par les vaccins bivalents et monovalents CoV2 preS dTM-AS03 contre une pointe D614 ancestrale et une pointe b Omicron BA.5. Les symboles représentent la fréquence individuelle des lymphocytes B mémoire sécrétant des IgG spécifiques/totales (%) chez les macaques immunisés avec le vaccin bivalent (5 µg + 5 µg) (losanges bleus), monovalent D614 (10 µg) (carrés noirs) ou bêta monovalent (10 µg) (points violets) et barre la médiane de chaque groupe.

En plus des anticorps neutralisants, les fonctions de liaison au récepteur Fc et d'effecteur d'anticorps ont été évaluées car il a été précédemment démontré qu'elles contribuent à l'élimination de l'infection par le SRAS-CoV-230. La formulation bivalente a suscité un titre IgG1 et des anticorps liant FcR2a similaires contre D614 et Beta Spikes par rapport aux formulations de vaccin monovalent à 5 et 10 µg (Fig. 6a, b).

a Les tracés de points montrent le titre IgG1 contre D614 (à gauche) ou Beta (à droite) Spike. b Les tracés de points montrent le titre de liaison FcR2a par rapport à D614 ancestral (panneaux de gauche) ou Beta (panneaux de droite) Spike. c Les diagrammes de points montrent la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP) contre le Spike ancestral D614 (à gauche) ou Beta (à droite). d Les diagrammes de points montrent le dépôt de complément dépendant des anticorps (ADCD) contre le Spike ancestral D614 (à gauche) ou Beta (à droite). e Les cartes thermiques montrent le score z médian pour toutes les caractéristiques d'anticorps mesurées par rapport au D614 Spike ancestral (à gauche) ou au Beta Spike (à droite). La signification a été déterminée par un test de Kruskal-Wallis suivi d'une correction post-hoc de la valeur p de Benjamini-Hochberg pour les comparaisons multiples. MFI intensité moyenne de fluorescence. a–d Les symboles représentent les valeurs individuelles chez les macaques immunisés avec le vaccin bivalent (5 µg + 5 µg) (points noirs), les vaccins monovalents à 5 µg (points rouges) ou les vaccins monovalents à 10 µg (points verts) et barrent la médiane de chaque groupe.

Nous avons ensuite mesuré la capacité des anticorps de ces différentes formulations vaccinales à induire des fonctions effectrices cellulaires. Nous avons constaté que la formulation bivalente induisait significativement moins de phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP) contre D614 Spike par rapport à la formulation monovalente à 10 µg (Fig. 6c). Aucune différence significative n'a été observée quant à la capacité des anticorps à provoquer un dépôt de complément dépendant des anticorps (ADCD) (Fig. 6d).

Pour comprendre la différence entre les formulations bivalentes et monovalentes à un niveau général, nous avons tracé une carte thermique du score z de tous les titres d'anticorps mesurés, de la liaison FcR et des fonctions effectrices d'anticorps contre D614 (Fig. 6e, panneaux de gauche) ou Beta (Fig. 6e, panneaux de droite). Cette analyse n'a révélé aucun schéma spécifique distinguant les formulations bivalentes des formulations monovalentes. Ces données mettent en évidence que la formulation bivalente induit un titre d'anticorps de sous-classe IgG et une fonction de liaison FcR robustes, comparables aux formulations monovalentes.

D'autres analyses des fonctions effectrices induites par les différentes formulations ont été réalisées contre le variant Omicron (BA.1) Spike. Le titre de liaison IgG1 à l'Omicron Spike était fortement corrélé à la liaison IgG1 D614G (Fig. 4a supplémentaire), mais a montré une diminution de la liaison comme indiqué dans les études précédentes31. La formulation bivalente a induit des anticorps spécifiques de Spike contre Omicron avec des titres similaires (supplémentaire. Fig. 4b) et une liaison FcR2a et FcR3a similaire (supplémentaire Fig. 4c) par rapport aux formulations monovalentes D614 et Beta à 5 et 10 µg. Alors que toutes les formulations induisaient une phagocytose cellulaire et neutrophile dépendante des anticorps similaire (ADCP et ADNP, respectivement), la formulation monovalente bêta de 10 µg induisait un ADCD plus élevé que la formulation monovalente bêta de 5 µg et avait une tendance plus élevée que toutes les autres formulations (Fig. 4d supplémentaire) . On ne sait pas si l'augmentation de l'activité ADCD est simplement due à une dose de vaccin plus élevée ou à l'induction d'IgM contre Omicron.

Enfin, pour comprendre si la formulation du vaccin bivalent induit une réponse anticorps plus large, nous avons tracé le rang centile médian des titres d'IgG1 pour la formulation bivalente et les quatre formulations monovalentes contre D614G, Omicron, Alpha, Beta et Delta Spike (Supplément figure 4e). Cette analyse suggère que la formulation bivalente et les deux formulations monovalentes D614 et Beta à 10 µg peuvent offrir une réponse IgG plus large que les formulations monovalentes à 5 µg.

Nous avons ensuite étudié la protection conférée par le vaccin bivalent chez les hamsters syriens dorés contre la réplication virale et la pathologie pulmonaire induite par la provocation virale avec les prototypes D614G, variantes Alpha et Beta. Trois cohortes de 32 hamsters (chacune divisée en quatre groupes de huit animaux) ont été immunisées avec du tampon (groupe témoin), du D614 monovalent, du bêta monovalent ou du CoV2 préS dTM-AS03 bivalent (D614 + bêta), en utilisant le vaccin à deux doses Régime J0/J21, par voie intramusculaire à 1 µg de chaque antigène (Fig. 7a). Quatre semaines après la deuxième dose, chaque cohorte a été provoquée soit par le prototype de virus D614G, Alpha ou Beta, en utilisant des doses infectieuses préalablement caractérisées pour induire entre 10 et 20 % de perte de poids corporel.

un schéma d'étude. Des hamsters ont été vaccinés avec le bivalent D614 + Beta (1 µg + 1 µg) et le monovalent D614 ou Beta (1 µg), à J0 et J21. b Les titres d'IgG spécifiques S ont été dosés chez des hamsters individuels immunisés avec le vaccin bivalent (losanges bleus), le vaccin monovalent D614 (carrés noirs) ou le vaccin bêta monovalent (points violets) à J0, J21 (après la première dose), et J35 (après deuxième dose). c Les titres de nAb du PsV contre les variants prototypes D614G, Alpha, Delta et Beta ont été dosés à J35 chez des hamsters vaccinés et non vaccinés. Les symboles représentent les données individuelles et les barres la moyenne du groupe. Les lignes pointillées horizontales correspondent à l'inverse de la plus faible dilution des dosages.

Avant le défi, les titres d'IgG spécifiques au S (ELISA) et de nAb contre le prototype D614G, Alpha, Beta et Delta VOC ont été évalués dans des sérums de hamsters vaccinés et non vaccinés, à l'aide de tests lentivirus-pseudovirus. Les différentes formulations de vaccins ont induit des IgG S-spécifiques chez tous les hamsters 21 jours après la première injection à l'exception de 1 et 2 hamsters dans les groupes vaccin monovalent D614 et Beta, respectivement. Les titres moyens d'IgG variaient de 3,2 à 3,5 log10 unités ELISA (UE), comme le montre la figure 7b, et étaient comparables dans tous les groupes vaccinés. Les titres moyens d'IgG spécifiques au S ont augmenté à ~ 5,0 log10 UE, 2 semaines après la deuxième dose, sans différences statistiquement significatives entre les différentes formulations de vaccin. Conformément aux observations antérieures chez les macaques, la formulation du vaccin bivalent a provoqué des titres de nAb élevés et équilibrés à J35 contre le prototype D614G, Alpha, Delta et Beta avec des titres moyens compris entre 2,7 et 3,2 log10 (Fig. 7c). La formulation monovalente D614 a induit des titres de nAb élevés et équilibrés contre le prototype D614G, Alpha et Delta (titres moyens entre 2,9 et 3,1 log10), alors que les nAb étaient plus faibles contre Beta (titres moyens de 1,5 log10). Il convient de noter que deux hamsters vaccinés avec le vaccin monovalent D614 présentaient de faibles titres d'IgG spécifiques au S (3,0 et 4,2 log10 EU) et aucun titre de nAb détectable, 2 semaines après la deuxième dose. À l'inverse, la formulation bêta monovalente n'a induit que des titres élevés de nAb contre le pseudovirus bêta homologue (titres moyens de 3, 1 log10) et des titres de nAb inférieurs contre les prototypes D614G, Alpha et Delta (titres moyens entre 1, 9 et 2, 5 log10; Fig. 7c). Ces données sont en accord avec nos observations chez les macaques ne montrant aucune interférence immunitaire entre les deux antigènes.

Des titres de nAb plus élevés et statistiquement significatifs contre Beta ont été observés avec la formulation bivalente par rapport à la formulation monovalente D614 (38 fois, P < 0,001), et pour le prototype D614G (6,5 fois, P < 0,001), Alpha (3,7 fois, P = 0,0144) et Delta (7,3 fois, P < 0,001) titres nAb par rapport au vaccin bêta monovalent.

Pour évaluer la protection contre le prototype (D614G) et les variantes (Alpha et Beta), le changement de poids corporel a été surveillé jusqu'à 7 jours après la provocation en tant que marqueur de la progression de la maladie, et les charges virales pulmonaires et la pathologie ont été évaluées après autopsie à J4 ou J7 à la moitié des animaux. Les hamsters non vaccinés (tampon) ont perdu jusqu'à 18 % de leur poids corporel 7 jours après la provocation avec Beta et Alpha et jusqu'à 10 % après la provocation du prototype D614G (Fig. 8a), tandis que les poids des hamsters non vaccinés sont restés stables ou ont légèrement augmenté pendant la même période. À l'exception des deux hamsters faiblement répondeurs (sans titres de nAb) vaccinés avec le vaccin monovalent D614, tous les hamsters vaccinés, quelles que soient les formulations vaccinales, avaient un poids corporel stable ou en légère augmentation après l'épreuve, suivant le même profil que le groupe non provoqué.

Des hamsters vaccinés avec le bivalent D614 + Beta (1 µg + 1 µg) et le monovalent D614 ou Beta à (1 µg), ont été stimulés (N = 8/groupe) avec les virus prototypes D614G, Alpha ou Beta, 28 jours après la deuxième dose. a Le changement de poids corporel individuel a été évalué quotidiennement, pendant les 7 jours suivant la provocation. Les symboles représentent les données individuelles et les lignes la moyenne du groupe. b La charge virale par titrage infectieux, c le score de pathologie (basé sur le % de tissu affecté : 0 = 0 % ; 1 < 25 % ; 2 = 25 – 50 % ; 3 > 50 %) et d le pourcentage de surface protéique de la nucléocapside ont été évalués dans les poumons d'un hamster individuel, 4 ou 7 jours après la provocation. Les barres représentent la médiane du groupe pour le score de pathologie et le pourcentage de surface protéique de la nucléocapside, la ligne pointillée représente la limite de détection.

Les charges virales ont été mesurées dans les poumons 4 et 7 jours après la provocation (la moitié des animaux par groupe et par point de temps) en utilisant un titrage de dose infectieuse de culture tissulaire à 50 % (TCID50). Dans chaque cohorte, le groupe non vacciné (tampon) a montré des charges virales élevées 4 jours après la provocation à des charges virales moyennes de 8,8 log10, 8,6 log10 et 8,3 log10 TCID50 dans les cohortes D614G, Alpha et Beta, respectivement (Fig. 8b) . A J4 post-challenge, les hamsters vaccinés avec les vaccins Bêta bivalents ou monovalents présentaient des charges virales faibles à indétectables, quel que soit le virus utilisé pour le challenge (D614G, Alpha ou Bêta). Les hamsters vaccinés avec le vaccin monovalent D614 présentaient également des charges virales faibles à indétectables à J4, à l'exception des deux hamsters de la cohorte de provocation Alpha qui présentaient des charges virales élevées compatibles avec une perte de poids corporel et aucun titre de nAb détectable. Un hamster vacciné avec le monovalent D614 a également montré une charge virale élevée dans la cohorte provoquée avec le variant Beta.

Dans les trois cohortes, les titres infectieux étaient faibles à indétectables 7 jours après la provocation.

Nous avons ensuite évalué la pathologie pulmonaire 4 et 7 jours après la provocation par une évaluation microscopique de coupes pulmonaires colorées à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E) ou soumises à une immunohistochimie de la protéine nucléocapside anti-SARS-CoV-2 (IHC). Pour les trois souches virales, la pathologie chez les hamsters non vaccinés (tampon) consistait en des régions multifocales à coalescentes d'infiltrat inflammatoire composé de macrophages, de lymphocytes, d'hétérophiles et de cellules syncytiales mélangées à des hémorragies et des débris cellulaires effaçant souvent l'architecture normale (Fig. 9a et Fig. . 5). Il y avait une hyperplasie pneumocyte de type II marquée et l'épithélium bronchiolaire était hyperplasique multifocal caractérisé par de nombreuses cellules épithéliales s'empilant et entrecoupées de rares cellules nécrotiques. La lumière de certaines bronchioles contenait des débris cellulaires nécrotiques. Les vaisseaux sanguins révèlent soit une infiltration murale soit périvasculaire par des infiltrats inflammatoires mixtes. La pathologie pulmonaire était nettement atténuée chez les hamsters vaccinés. Des scores semi-quantitatifs ont été établis sur la base du pourcentage de poumon affecté.

a Microphotographies représentatives à faible grossissement (8x) (H&E). Les poumons de hamsters recevant uniquement du tampon, les vaccins monovalent D614 ou Beta (1 µg) et bivalent D614 + Beta (1 µg + 1 µg) ont été évalués après coloration H&E, 7 jours après la provocation avec les prototypes D614G, Alpha et Beta virus. Flèches = infiltrat inflammatoire, hyperplasie des pneumocytes de type II, débris cellulaires représentés par des régions violet foncé. b L'expression des protéines de la nucléocapside a été analysée par immunohistochimie dans les poumons de hamsters 4 jours après la provocation avec les prototypes de virus D614G, Alpha et Beta.

Tous les hamsters non vaccinés avaient des scores médians de pathologie pulmonaire de 2 (sur une échelle de 0 à 3), 4 jours après la provocation avec les prototypes D614G et Alpha, et un score de 1 ou 2 dans le groupe testé avec Beta (Fig. 8c). Sept jours après l'épreuve, la pathologie a progressé chez tous les animaux non vaccinés jusqu'au score maximal de 3, quelle que soit la souche utilisée pour l'épreuve. En revanche, les hamsters vaccinés avec les vaccins monovalents ou bivalents n'ont présenté aucune pathologie ou une pathologie minimale (scores de 0 ou 1), au jour 4 ou 7 après l'épreuve, à l'exception des deux hamsters faiblement répondeurs vaccinés avec D614 et provoqués avec la variante Alpha, qui affichaient des scores de 2 et 3, compatibles avec les charges virales élevées. Dans la même cohorte (épreuve Alpha), un hamster vacciné avec le bêta monovalent a montré un score de 2, 4 jours post-épreuve ; cependant, une analyse post hoc a indiqué que la pathologie était moins développée que dans les témoins immunisés avec un tampon avec des scores similaires. De plus, alors que l'immunohistochimie a montré l'expression de la protéine de la nucléocapside dans les régions multifocales à coalescentes des poumons chez les hamsters non vaccinés 4 jours après l'épreuve, la protéine de la nucléocapside n'a été détectée chez aucun hamster vacciné au même moment, sauf chez les deux animaux faiblement répondeurs immunisés avec le monovalent Vaccin D614 (Figs. 8d, 9b).

Dans l'ensemble, le bivalent D614/Beta, ainsi que les deux vaccins monovalents CoV2 préS dTM-AS03 (D614 et Beta), ont conféré une protection chez les hamsters contre la perte de poids corporel, la réplication virale dans les poumons et la pathologie pulmonaire induite par le prototype D614G, Alpha ou Variantes bêta.

La transmission du SRAS-CoV-2 est encore incontrôlée dans de nombreuses régions du monde, et l'émergence de variants résistants aux vaccins tels qu'Omicron et ses sous-variants a mis en évidence les limites des stratégies de rappel vaccinal basées sur la souche ancestrale D614 Wuhan et a stimulé le développement de nouvelles formulations de rappel de vaccin basées sur des variantes de pointes32,33,34,35,36.

Ici, nous avons évalué l'immunogénicité et l'efficacité conférées par une formulation de vaccin recombinant bivalent CoV2 préS dTM avec adjuvant AS03 contenant les trimères Spike stabilisés par préfusion des souches ancestrales D614 et bêta (B.1.351) chez des PNH et des hamsters naïfs après une série de vaccination primaire. Le modèle NHP a une prédictivité élevée pour l'immunogénicité du vaccin COVID-19 et le hamster syrien doré s'est avéré être un modèle de choix pour évaluer l'efficacité du vaccin contre la pathologie causée par les variants du SRAS-CoV-237,38.

Les résultats de notre étude démontrent l'immunogénicité large et durable conférée par le vaccin D614/Beta à base de protéines bivalentes CoV2 preS dTM-AS03 chez les PSN jusqu'à 1 an. Plus précisément, le vaccin bivalent induit des réponses anticorps neutralisantes élevées contre les virus homologues du vaccin (D614, D614G et Beta) et Alpha, Gamma, Delta et Mu VOC, atteignant des niveaux stables entre 3 et 12 mois. Il est important de noter que le vaccin bivalent suscite également des anticorps neutralisants croisés contre le SRAS-CoV-1 de l'épidémie de 2003 ainsi que des anticorps neutralisants croisés cohérents et persistants contre Omicron BA.1 et BA.4/5. Nous avons également mesuré l'induction de niveaux élevés de lymphocytes B mémoire spécifiques à Spike (ancestraux D614 et Omicron BA.4/5) à 1 an après l'immunisation avec les trois formulations. De plus, la combinaison des deux antigènes (D614 et Beta CoV2 preS dTM) dans la formulation du vaccin bivalent n'a pas réduit l'immunogénicité de l'un ou l'autre des antigènes par rapport aux formulations monovalentes. Les réponses de neutralisation croisée étendues induites par la formulation bivalente peuvent s'expliquer par les effets additifs des deux composants du vaccin, qui présentent des profils opposés en ce qui concerne la neutralisation des variants. En effet, le vaccin monovalent D614 induit des Abs neutralisants croisés contre D614G, Alpha et Delta contenant l'acide aminé E484 d'origine, tandis que le vaccin monovalent Beta induit des Abs neutralisants croisés contre Gamma et Mu contenant la mutation E484K responsable de la majeure partie de l'échappement des anticorps20 . La neutralisation constante de la variante Omicron beaucoup plus éloignée (avec la mutation E484A) pourrait être le résultat d'un effet complémentaire ou synergique vers des épitopes conservés qui pourraient être sous-dominants dans chaque vaccin monovalent39,40.

Pour compléter les résultats de la neutralisation, des analyses sérologiques approfondies du système ont indiqué que la formulation bivalente a suscité des sous-classes d'IgG et des fonctions Fc globalement similaires par rapport à chaque formulation monovalente.

Fait intéressant, lorsque nous avons comparé le schéma de vaccination à deux doses avec le vaccin bivalent à des schémas de vaccination hétérologues alternatifs, avec le D614 monovalent suivi de vaccins bêta monovalents ou bivalents, seule la deuxième injection de bêta monovalent a induit des réponses neutralisantes équilibrées, et avec une variabilité plus élevée que deux doses avec le vaccin bivalent. La performance inférieure du prime/boost hétérologue a également été observée chez les souris où des atn inférieurs (ancestraux, Alpha, Bêta et Gamma) ont été induits avec une vaccination hétérologue avec le vaccin S-trimère (J614 à J0 et Bêta à J21), par rapport à deux -doses avec un vaccin bivalent41. L'ampleur limitée des réponses observées dans notre étude avec le régime hétérologue D614/Bêta contraste avec l'ampleur élargie des réponses neutralisantes observées récemment après un rappel tardif chez les PSN et les humains14,15,16. Ceci est vraisemblablement lié à l'absence de maturation de la population de lymphocytes B mémoire lorsque la deuxième injection est réalisée peu de temps après la primovaccination (3 semaines ici contre 6 mois à 1 an dans le cadre d'une vaccination de rappel)42,43. Alors que dans le schéma hétérologue D614 prime/Bivalent boost, le profil Ac D614 observé correspond au « péché antigénique originel », où la première exposition détermine les réponses Ac induites par les vaccinations de rappel44,45, dans le cadre de la vaccination rappel COVID, le l'immunisation primaire active efficacement les centres germinatifs qui génèrent ensuite des réponses Ab plus larges avec le temps46.

L'étude a montré une stabilité des titres neutralisants entre 3 et 12 mois avec les différentes formulations de vaccins CoV2 preS dTM-AS03 après une primovaccination en deux doses. Cela contraste avec le déclin continu des nAb observé avec le vaccin mRNA-1273 sur une période similaire (jusqu'à J209) chez l'homme47.

À notre connaissance, ce sont les premières données montrant une neutralisation croisée étendue couvrant tous les COV émergents jusqu'à 12 mois dans les PSN après une primovaccination en deux doses. Des études antérieures ont montré que les vaccins candidats à base de bivalents ou de nanoparticules étaient capables d'induire des réponses d'anticorps neutralisants équilibrées contre les COV, mais les données étaient limitées aux souris ou documentées sur un panel plus limité de variantes41,48,49,50. D'autres candidats, basés sur des nanoparticules de Spike-ferritine ou des nanoparticules de RBD-ferritine, ont montré une ampleur similaire contre le SRAS-CoV-1 et la durabilité des Ab ; cependant, ces candidats sont à des stades de développement clinique plus précoces51,52,53. De futures études sur les plasmocytes à longue durée de vie et les compartiments des lymphocytes B mémoire seraient justifiées pour mieux comprendre la durabilité des réponses Ab avec l'ARNm et les vaccins à base de protéines.

Dans cette étude, nous avons également montré l'efficacité du vaccin chez les hamsters où la formulation de vaccin bivalent contenant de la bêta protégeait de la pathologie pulmonaire et de la réplication virale après une provocation avec les variantes D614G, Alpha et Beta. La protection contre l'infection et la pathologie a été observée chez les animaux avec des titres d'anticorps neutralisants croisés réduits provoqués par l'immunisation avec les formulations monovalentes, confirmant l'absence de maladie accrue dans le contexte d'une infection hétérologue. Il convient de noter que deux hamsters du groupe du vaccin monovalent D614 ont montré de faibles titres de liaison d'anticorps (ELISA) et aucun titre d'anticorps neutralisant détectable, 2 semaines après la deuxième dose. Ces observations étaient corrélées avec des signes cliniques d'infection après le challenge (perte de poids, réplication virale et pathologie pulmonaire). Une analyse exploratoire a indiqué que la protection contre la pathologie était associée à des titres détectables d'anticorps neutralisants ; cependant, aucun seuil n'a pu être identifié. Des études futures seraient nécessaires pour définir les seuils de protection des variants54,55 et pour explorer le rôle des réponses des lymphocytes T à réaction croisée induites par le vaccin dans la protection vaccinale56.

Bien que les études présentées ici aient impliqué un faible nombre d'animaux par groupe et évalué la protection peu après l'immunisation, les résultats ont été récemment confirmés dans un vaste essai clinique d'efficacité (NCT04904549), où des niveaux élevés de protection contre l'infection symptomatique d'Omicron ont été démontrés après une primo-immunisation avec le vaccin bivalent CoV2 preS dTM-AS03 contenant de la bêta57. Fait intéressant, dans deux autres essais cliniques de phase 3 (NCT04762680, NCT05124171), le vaccin bêta monovalent CoV2 préS dTM-AS03 a montré une supériorité significative par rapport au vaccin à base de D614 dans le renforcement des attrapes Omicron chez les adultes préalablement amorcés avec des vaccins ARNm COVID-1916,17 .

Compte tenu de l'évolution virale rapide et continue en sélectionnant des variants d'échappement immunitaire, la population naïve, comme les jeunes ou ceux qui ne sont pas encore vaccinés, et la population précédemment vaccinée, pourraient bénéficier des réponses immunitaires larges et durables conférées par le préS CoV2 contenant des bêta formulations de vaccin dTM-AS03.

Les séquences protéiques sont disponibles sur GISAID en utilisant les codes d'accession fournis dans le manuscrit : séquences B.1.351 GISAID Accession EPI_ISL_1048524. Les données sources générées dans cette étude sont fournies en tant que données supplémentaires 1. Toutes les autres données étaient disponibles auprès de l'auteur correspondant (ou d'autres sources, le cas échéant) sur demande raisonnable.

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Membres de l'équipe d'histopathologie et d'IHC de Sanofi Global Discovery Pathology (TIM) pour leur excellente aide technique en histologie et procédures d'IHC sur les échantillons de poumon de hamster. Les auteurs remercient Jon Smith pour avoir coordonné la production et fourni les antigènes vaccinaux pour l'étude, Caroline Patriarca- Ruat pour la gestion du projet, et Carlos Diaz-Granados, Stephen Savarino et Saranya Sridhar pour des discussions critiques sur la conception de l'étude et l'analyse des données. Les auteurs remercient Dean Huang pour avoir testé les sérums de hamster en ELISA et Julie Piolat pour le soutien des analyses statistiques. Les auteurs remercient également Isabel Grégoire, Hardik Ashar, Priya Upadhyay et Hanson Geevarghese (Sanofi) pour leur assistance éditoriale et la coordination des articles. Ce travail a été réalisé en collaboration avec GSK, qui a fourni l'accès et l'utilisation du système adjuvant AS03. Le financement a été fourni en partie par Sanofi et par la Biomedical Advanced Research and Development Authority (BARDA), Administration for Strategic Preparedness and Response du Département américain de la Santé et des Services sociaux sous le contrat n° HHSO100201600005I, et en collaboration avec le Département américain de la Défense Bureau exécutif du programme conjoint pour la défense chimique, biologique, radiologique et nucléaire sous le contrat # W15QKN-16-9-1002.

Ces auteurs ont contribué à parts égales : Catherine Berry, Vincent Pavot.

Sanofi, R&D vaccins, Marcy l'Etoile, France

Catherine Berry, Vincent Pavot, Alice Raillard, Sylviane Gautheron & Valérie Lecouturier

Sanofi, R&D sur les vaccins, Cambridge, MA, États-Unis

Natalie G. Anosova, Michael Kishko, Lu Li, Tim Tibbitts et Roman M. Chicz

Sanofi, Framingham, MA, États-Unis

Sheila Cummings et Dinesh S. Bangari

BIOQUAL Inc, Rockville, MD, États-Unis

Swagata Kar

Ragon Institute of MGH, MIT et Harvard, Cambridge, MA, États-Unis

Caroline Atyeo, Yixiang Deng et Galit Alter

GSK, Rixensart, Belgique

Cindy Gutzeit

GSK, Wavre, Belgium

Marguerite Koutsoukos

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VL, TT, CB, VP, AR, SG, NGA, RMC, CG, M.Ko, CA et GA ont contribué au concept ou à la conception de l'étude. MK, SG, AR, SG, DSB, SK et CA ont contribué à la réalisation de l'étude et à l'analyse des échantillons. VL, TT, CB, VP, AR, SG, NGA, RMC, CG, MK, CA, GA, CG et M.Ko ont été impliqués dans l'interprétation des données et l'examen du manuscrit. VL, VP et CB ont rédigé le premier manuscrit.

Correspondance à Valérie Lecouturier.

CB, VP, NGA, MK, DH, TT, AR, SG, DSB, RMC et VL sont des salariés de la société Sanofi et peuvent détenir des actions. SC était un employé de Sanofi au moment de la conduite de l'étude et actuellement employé chez AbbVie et détient des actions de Sanofi. SK est un employé de Bioqual et ne signale aucun conflit. GA est cofondateur et agit en tant que consultant auprès de SeromYx Systems Inc. et a un brevet en instance par l'intermédiaire de SeromYx Systems Inc. CA et GA étaient des employés de l'Institut Ragon du MGH, du MIT et de Harvard au moment de la conduite de l'étude et sont actuellement employés chez Moderna. YD n'a rien à divulguer. M.Ko et CG sont des employés du groupe de sociétés GSK et déclarent détenir des actions GSK.

Communications Medicine remercie Teresa Aydillo-Gomez et les autres examinateurs anonymes pour leur contribution à l'examen par les pairs de ce travail. Les rapports des pairs examinateurs sont disponibles.

Note de l'éditeur Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

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Réimpressions et autorisations

Berry, C., Pavot, V., Anosova, NG et al. Le vaccin protéique bivalent SARS-CoV-2 contenant de la bêta provoque une large neutralisation durable chez les macaques et une protection chez les hamsters. Commun Med 3, 75 (2023). https://doi.org/10.1038/s43856-023-00302-z

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Reçu : 19 août 2022

Accepté : 09 mai 2023

Publié: 26 mai 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s43856-023-00302-z

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